當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養>>原代細胞>> T25m2小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞說明
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞【Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | 小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞說明 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-963843 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
人結蛋白(Des)試劑盒 Human desmin ELISA Kit 酸性橙74 Acid Orange 74 質量規格:>85%
人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)試劑盒 Human connective tissue-activating peptide Ⅲ,CTAPⅢ ELISA Kit 煌橙,藏花橙G Crocein Orange G 質量規格:BS
人結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測試劑盒HumanHaptoglobin,Hpt/HP 96T/48T 靛紅(吲哚醌) Isatin 質量規格:AR
人結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 Human Hpt/HP ELISA KIT 奈比洛爾鹽酸鹽;奈必洛爾 Nebivolol 質量規格:>99%,BR
人結核菌桿(TB)抗體(IgA)試劑盒 Human tuberculosis(TB)aibody(IgA)ELISA kit 奈必洛爾(標準品) Nebivolol 質量規格:HPLC>99%,標準品
人結核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)試劑盒 Human tuberculosis aibody IgG,TB-Ab IgG ELISA Kit 核固紅 Nuclear fast red 質量規格:BS
人結核菌桿抗體IgM(TB-Ab IgM)試劑盒 Human tuberculosis aibody IgM,TB-Ab IgM ELISA Kit 胭脂紅 Carmine 質量規格:BS,用于生物學染色
人結核菌素(Tuberculin)試劑盒 Human Tuberculin ELISA Kit 酚紅 Bromophenol red 質量規格:AR
人睫狀神經營養因子(CF)試劑盒 Human CF ELISA Kit 麗春紅2R(BS) Ponceau 2R 質量規格:BS
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA檢測試劑盒HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-Ab 96T/48T 孟加拉玫瑰紅,酸性紅94 Rose bengal 質量規格:AR
冰凍切片組織PASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 替拉替尼 17-AAG 質量規格:HSP90 抑制劑,BR,進分
RatCollageypeⅠ,ColⅠELISA試劑盒大鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒規格:96T/48T 替拉替尼 17-AAG 質量規格:HSP90 抑制劑,BR,進分
小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 ,英文名: GHRP-Ghrelin ELISA Kit 鹽酸特拉唑嗪 Terazosin HCl 質量規格:>98.5%,二水合物
小鼠紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA檢測試劑盒MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 96T/48T ,素 Testosterone 質量規格:>98%,BR,可用于細胞培養
人高分子量細胞角蛋白(CK-HMW)試劑盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA Kit (標準品) Testosterone 質量規格:HPLC≥98%標準品
RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鹽酸丁卡因 Tetracaine HCl 質量規格:>98.5%,BR
BJ5183-AD-1鈣轉感受態細菌100微升 鹽酸丁卡因(標準品) Tetracaine HCl 質量規格:HPLC法含量測定
MouseIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規格:96T/48T 苯甲唑啉鹽酸鹽/鹽酸妥拉唑林 Tolazoline HCl 質量規格:>98%,進口原裝
小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒 ,英文名: GHRP ELISA Kit 托特羅定 Tolterodine Tartrate 質量規格:>98.5%,M受體(毒蕈堿型乙酰膽堿受體)拮抗劑
小鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA檢測試劑盒Mouseacidicfibroblastgrowthfactor1,aFGF-1ELISAKit 96T/48T 托特羅定(標準品) Tolterodine Tartrate 質量規格:含量測定
小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞說明大鼠膠原交聯(PYD)試劑盒 Rat pyridinoline,PYD ELISA Kit 萘酚AS NaphtholAS 質量規格:0.97
大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測試劑盒RatCollagenaseIELISAKit 96T/48T 萘啶酮酸;萘啶酸 Nalidixic acid 質量規格:>98%
大鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISA檢測試劑盒RatCollagenaseTypeIIELISAKit 96T/48T 萘丁美酮/萘普酮(標準品) Nabumetone 質量規格:HPLC>98%,標準品
大鼠膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)ELISA檢測試劑盒Ratglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISAKIT 96T/48T 萘丁美酮/萘普酮 Nabumetone 質量規格:>99%
大鼠膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)試劑盒 Rat glial cell line-derived neuroophic factor,GDNF ELISA KIT 萘-D8(標準品) Naphthalene-d8 質量規格:分析標準品
大鼠角化細胞因子(KAF)/雙調蛋白(AR)試劑盒 Rat keratinocyte aocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit 萘-1,4,5,8-四羧酸二酐(>95.0%(HPLC)(T)) Naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic Dianhydride 質量規格:>95.0%(HPLC)(T)
大鼠角化細胞生長因子(KGF)試劑盒 Rat Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISA Kit 萘[2,3-a]芘(>98.0%(GC)) Naphtho[2,3-a]pyrene 質量規格:>98.0%(GC)
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA檢測試劑盒RatCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 96T/48T 耐斯糖(標準品) NISTOSE 質量規格:含量測定
大鼠結蛋白(Des)ELISA檢測試劑盒RatDesmin,DesELISAKit 96T/48T 耐斯糖 HPLC≥98% 20mg
大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測試劑盒RatHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T 耐爾藍A(>65%,BS) Nile blue A 質量規格:>65%,BS
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