當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養>>原代細胞>> T25m2大鼠主動脈平滑肌細胞說明
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
產品名稱 | 大鼠主動脈平滑肌細胞說明 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-963883 |
大鼠主動脈平滑肌細胞【Rat Aorta: Normal Aortic Smooth Muscle Cells】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠腦源性神經營養因子(BDNF)ELISA檢測試劑盒MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNF 96T/48T 鹽酸甲氧那明(標準品) Methoxyphenamine HCl 質量規格:含量測定
小鼠腦源性神經營養因子(BDNF)ELISA試劑盒 ,英文名: BDNF ELISA Kit 愈創木酚磺酸鉀(標準品) Potassium guaiacolsulfonate hemihydrate 質量規格:供HPLC法含量測定用
小鼠腦指蛋白(BFP)ELISA試劑盒 ,英文名: BFP ELISA Kit 棓丙酯(標準品) Propyl gallate 質量規格:含量測定
小鼠內(ET)ELISA檢測試劑盒Mouseendotoxin,ET 96T/48T 氯美扎酮(標準品) Chlormezanone 質量規格:UV法溶出度檢查
小鼠內(ET)ELISA試劑盒 ,英文名: ET ELISA Kit 氫鈣(標準品) Calcium hydrogenphosphate dihydrate 質量規格:UV法含量測定
小鼠腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA檢測試劑盒MouseEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGF 96T/48T 磺胺二甲嘧啶 (標準品) Sulfamethazine 質量規格:含量測定
小鼠腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒 ,英文名: EG-VEGF ELISA Kit 磺胺脒(標準品) Sulfaguanidine 質量規格:HPLC法含量測定
小鼠腺來源血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒 ,英文名: EG-VEGF ELISA Kit 芬布芬(標準品) Fenbufen 質量規格:含量測定
小鼠內磺肽α(ENSα)ELISA試劑盒 ,英文名: ENSα ELISA Kit 曲克蘆丁(標準品) Troxerutin 質量規格:HPLC法含量測定
小鼠內凝集蛋白1(ITLN1)ELISA試劑盒 ,英文名: ITLN1 ELISA Kit 二羥丙茶堿(標準品) Diprophylline 質量規格:含量測定
大鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)試劑盒 Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA KIT 四氫生物蝶呤;沙丙蝶呤;(6R)-BH4 Tetrahydro-L-Biopterin (di) 質量規格:>99%
英文名稱HumanMGα1ELISAKit人α1微球蛋白(MGα1)規格:96T/48T 安倍生坦 Ambrisentan 質量規格:>98%
動物組織β-半乳糖苷酶活性超敏熒光定量檢測試劑盒20 安倍生坦(標準品) Ambrisentan 質量規格:>98%,標準品
Salmoncalcitonin,SCTELISA試劑盒鮭魚降鈣素(SCT)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鹽酸決奈達隆 Dronedarone HCL 質量規格:>99%,鹽酸鹽
小鼠趨化因子C-C-基元受體1(CCR1)ELISA試劑盒 ,英文名: CCR1 ELISA Kit 決奈達隆(標準品) Dronedarone 質量規格:HPLC>98%,標準品
豬α干擾素(IFN-α)ELISA檢測試劑盒PorcineIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T 雷諾嗪 Ranolazine HCl 質量規格:>99%,BR
大鼠壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒 Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ ELISA KIT 雷諾嗪(標準品) Ranolazine HCl 質量規格:HPLC>98%,標準品
英文名稱Humanα1-AcidglycoproteinELISAKit人α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)規格:96T/48T 樂卡地平鹽酸鹽 Lercanidipine HCl 質量規格:>99%
動物組織β-半乳糖苷酶活性高質敏感比色法定量檢測試劑盒20 樂卡地平鹽酸鹽(標準品) Lercanidipine HCl 質量規格:HPLC>99%,標準品
SheepComplemefragme3brccptor,C3bRELISA試劑盒綿羊補體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鹽酸異丙嗪 Promethazine 質量規格:>98%,進分
大鼠主動脈平滑肌細胞說明大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)試劑盒 Rat Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit 氯解磷定(標準品) 2-Pyridinealdoxime methochloride 質量規格:HPLC法含量測定
大鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA檢測試劑盒Ratdeoxypyridinoline,DPDELISAKit 96T/48T 氯己定(標準品) Chlorhexidine 質量規格:分析標準品,99.5%
大鼠脫氧膠原交聯(DPD)試劑盒 Rat deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit 氯磺隆 Chlorosulfuron 質量規格:>93%,BR
大鼠蛙皮素,雨蛙肽試劑盒 Rat Ceruletide/Cerulein/Caerulein ELISA Kit 氯磺酚S Sulfochlorophenol S calcium salt 質量規格:顯色劑,96.0%
大鼠晚期糖基化端產物特異受體(AGER)試劑盒 Rat Advanced glycosylation end product-specific receptor,AGER ELISA kit 氯化熒光素(>90.0%(HPLC)) Fluorescein Chloride 質量規格:>90.0%(HPLC)
大鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)ELISA檢測試劑盒Ratadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit 96T/48T 氯化銀(>99%,BC) Silver chloride 質量規格:>99%,BC
大鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)試劑盒 Rat Peosidine ELISA Kit 氯化亞銅(>97%,BR) Copper(I) chloride 質量規格:>97%,BR
大鼠晚期氧化蛋白產物(AOPP)試劑盒 Rat advanced oxidation protein products,AOPP ELISA kit 氯化亞鐵四水(AR) Iron (II) chloride, tetrahydrate 質量規格:AR,>99%
大鼠網膜素(omein)試劑盒 Rat omein ELISA Kit 氯化血紅素;血晶素 Hemin 質量規格:0.98
大鼠微管蛋白β3(TUBB3)試劑盒 Rat Tubulin Beta-3 Chain,TUBB3 ELISA Kit 氯化血根堿(標準品) Sanguinarine chloride 質量規格:HPLC≥98%,標準品
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