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上海莼試生物技術有限公司
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當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養>>原代細胞>> T25m2大鼠角膜上皮細胞操作

大鼠角膜上皮細胞操作

參  考  價面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號T25m2

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-20 15:53:52瀏覽次數:374次

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大鼠角膜上皮細胞操作收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

大鼠角膜上皮細胞【Rat Eye: Normal Corneal Epithelial Cells 產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1 HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。

產品名稱

大鼠角膜上皮細胞操作

規格

T25m2

貨號

CS-963920

收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。

實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率; 
5
.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37 5CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min
2PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min
3PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
5PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
英文名稱MouseIL-1sRⅠ小鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sR)ELISA試劑盒規格:96T/48T 9-(2',3',5'--氧基--β-D-阿糖)腺嘌呤  9-(2',3',5'-Tri-O-benzyl-β-D-arabinofuranosyl)adenine  質量規格:美國進口

英文名稱MouseIL-1sRⅡ小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sR)規格:96T/48T -9-(2-羥基-3-壬烷基)腺嘌呤鹽酸鹽  EHNA   質量規格:美國進口

英文名稱MouseIL-1sRⅡ小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sR)規格:96T/48T 2-氟腺嘌呤  2-Fluoroadenine  質量規格:美國進口

英文名稱MouseIL-1β小鼠白介素1β(IL-1β)規格:96T/48T 硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸鈉鹽  Thionicotinamide adenine dinucleotidephosphate  salt  質量規格:美國進口

英文名稱MouseIL-2sRα小鼠白介素2可溶性受體α鏈(CD25)(IL-2sRα)規格:96T/48T 煙酸腺嘌呤二核苷鈉鹽  Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate  salt  質量規格:美國進口

英文名稱MouseIL-2sRβ小鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)規格:96T/48T 煙酸腺嘌呤二核苷酸鈉鹽  Nicotinic acid adenine dinucleotide  salt  質量規格:美國進口

英文名稱Mouseinducibleniicoxidesyhase小鼠誘導型合成酶(iNOS)規格:96T/48T α-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸  α-Nicotinamide adenine dinucleotide  質量規格:美國進口

英文名稱MouseInhibinA小鼠抑制素A(INHA)規格:96T/48T NAD+, 鋰鹽  NAD+, Lithium Salt  質量規格:美國進口

英文名稱MouseinhibinB小鼠抑制素B(INHB0規格:96T/48T 9--d3-腺嘌呤  9-Methyl-d3 Adenine  質量規格:美國進口

英文名稱MouseInsulieceptorβ(ISR-β)小鼠胰島素受體β(ISR-β)規格:96T/48T β-煙酰胺腺嘌呤二核苷, 縮減環已基銨鹽  β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, reduced tetra(cyclohexyl ammonium) salt  質量規格:美國進口
小鼠嘌呤核苷酸0酸化酶(PNP)ELISA試劑盒 ,英文名: PNP ELISA Kit 甲酰胺  Formamide  質量規格:>99%,BR

小鼠S100蛋白(S-100)ELISA檢測試劑盒MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit 96T/48T 聚乙二醇8000  PEG 8000  質量規格:>99%,分子生物學級

人分泌成分(SC)試劑盒 Human secretory compone,SC ELISA Kit 氯化鋰(分子生物學級)  Lithium chloride  質量規格:>98%

RatLactoferrin,LTF/LFELISAKit大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒規格:96T/48T 硫酸亞鐵銨六水  Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate  質量規格:>99%,BR

ChusN6*培養基500毫升溶液/片劑 紅四氮唑  TTC,TTZ,Tetrazolium Red  質量規格:>98%,BR

Mousemucin-5subtypeB,MUC5BELISA試劑盒小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒規格:96T/48T 磺胺甲氧噠嗪  Sulfamethoxypyridazine  質量規格:>98%,BR

小鼠皮質酮/腎上腺酮(CO)ELISA試劑盒 ,英文名: CO ELISA Kit 磺胺甲氧噠嗪(標準品)  Sulfamethoxypyridazine  質量規格:分析標準品

小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA檢測試劑盒MousesolubleP-selectin,sP-selectinELISAKit 96T/48T TCEP;三-(2-甲酰乙基)膦鹽酸鹽  TCEP;   質量規格:>99%,BR

人肺炎支原體抗體(MP-Ab)試劑盒 Human Mycoplasma pneumoniae aibody,MP-Ab ELISA Kit 硫代硫酸鈉五水(AR)   thiosulfate, pentahydrate  質量規格:>99%,AR

RatLaminin,LNELISAKit大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒規格:96T/48T 化鈉(AR)   iodide  質量規格:>99.5%,AR
大鼠角膜上皮細胞操作蛋白飽和溶液1毫升 硫酸博萊霉素/博來霉素/爭光霉素  Bleomycin sulfate  質量規格:含量1.5~2.0U/mg,BR

蛋白變性液10毫升 硫酸鉍(>98%,BR)  Bismuth (III) sulfate  質量規格:>98%,BR

蛋白表位標記技術試劑盒5 硫酸鋇(>98%,BR)  Barium sulfate  質量規格:>98%,BR

蛋白儲存液10毫升 硫酸巴龍霉素(標準品)  Paromomycin Sulfate  質量規格:含量測定

蛋白電泳10倍濃縮運行緩沖液500毫升 硫酸巴龍霉素  Paromomycin Sulfate  質量規格:≥675 U/mg,USP28

蛋白電泳2倍樣品處理液10毫升 硫酸銨鋁十二水(>98%,BR)  Aluminum ammonium sulfate, dodecahydrate  質量規格:>98%,BR

蛋白電泳SYPRO橙色染色試劑盒10 硫酸銨  Ammonium sulfate  質量規格:>99%,分子生物學級

蛋白電泳固綠染色試劑盒10 硫酸氨基葡萄糖(標準品)  Glucosamine sulfate  質量規格:HPLC98%,標準品

蛋白電泳麗春紅染色試劑盒10 硫酸氨基葡萄糖 HPLC98% 20mg

蛋白電泳尼羅紅染色試劑盒20 硫酸安普霉素,硫酸阿布拉霉素  Apramycin sulfate  質量規格:>500U/mg,BR
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,375%CO2培養。

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