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硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)微量法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-24 12:28:00瀏覽次數:182次

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貨號 GOY-01S6379
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【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)微量法

100管/96樣

微量法

GOY-01S6379

商品介紹

測定意義

TPX屬于過氧化物酶家族,在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現抗氧化作用,功能與GPX類似,也是氧化還原循環關鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內,酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲甚至細菌和古細菌體內都含有該酶,在進化上高度保守。TPX與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發生調控密切相關。TPX的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。

測定原理:

TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長為240nm,通過測定240nm波長處吸光度的下降速率,即可計算出TPX活性。

需自備的儀器和用品:

紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、3ml石英比色皿、雙蒸水

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153443.png

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;

2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。

甲基托布津 分析標準品2-(二苯基膦基)乙 95%Anti- Beta-endorphin/FITC  熒光素標記人、大、小鼠、羊、牛beta內啡肽抗體IgG

乙酯 98%2-(二-叔丁基膦)-2'-(N,N-二甲基)聯苯 98%Anti-ENPP1/PC-1/FITC  熒光素標記抗核苷酸內焦/二酯1抗體IgG

甲酯 99%2-二環己基磷-2',4',6'-三異基聯苯 97%Anti-EGFL7/FITC  熒光素標記抗脈管發育(組裝)蛋白抗體IgG

癸二酸二甲酯 97%4,4'-二甲基-2,2'-聯吡 98%Anti-Phospho-EGFR(Tyr1045) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG

癸二酸二丁酯 98%2-雙環己基膦-2',6'-二甲氧基聯苯 95%Anti-Phospho-EGFR(Tyr1086) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG

仲辛 AR,98%(1,5-環辛二烯)二氯化鈀(II)  Pd 37.3%Anti-Phospho-EGFR(Tyr1148) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG

烯酰氯, 96%,含~0.05% 噻吩穩定劑[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀  Pd  14.5% Anti-Phospho-EGFR(Tyr1173) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG

四烷絡合物 1M solution in THF2,2'-聯吡 AR,99.0%Anti-Phospho-EGFR(Tyr845) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG

硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)微量法吐溫60 LR組蛋白去化JARID1B抗體eIF2 alpha  真核啟動因子2α抗體(eIFα2)

環氧烷  99%硫角質素抗體EID3  E1A樣分化抑制因子3抗體

2,2'-聯喹啉 98%角質生長因子調節蛋白2抗體EID1  乙酰轉移EID1抗體

2--1-,(正+反) 95%離子通道蛋白G蛋白4抗體EHZF/ZN521  鋅指蛋白521抗體

硫代乙乙酯 98%通道多聚體結構域KCTD18抗體EHHADH  三羥酰輔A脫氫抗體

乙異酯 99%胞質接頭蛋白Keap1EGR3  早期生長反應蛋白3抗體

3-氧丁乙酯 99% 舞蹈癥相關蛋白KALRN抗體EGR2  早期生長反應蛋白2抗體

過硫銨 99.99% metals basis內流通道蛋白Kir4.1抗體Egr1  早期生長應答蛋白1抗體

過硫銨 AR,98.5%樣蛋白3抗體EGFRvIII  因子受體III型突變體抗體

過硫銨 ACS, ≥98.0%KLF樣轉錄因子7抗體EGFR5/CLEC14A  因子受體5抗體

過硫銨 電泳級, ≥98%Kelch樣蛋白8抗體EGFR  因子受體抗體

過硫銨 分子生物學級, ≥98%離子通道蛋白家族KCNQ2抗體EGFR  因子受體抗體

過硫鈉 AR,99%離子通道多聚體結構域蛋白7抗體EGFP  重組增強型綠色熒光蛋白抗體

過硫鈉 99.99% metals basis通道蛋白1抗體EGFL8  因子樣蛋白8抗體

(±)-2-氨-1-丁 97%電壓門控通道蛋白1抗體EGFL7  類因子域7抗體

測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。


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