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胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)微量法

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更新時間:2022-04-24 12:06:27瀏覽次數:260次

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【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)微量法

100管/96樣

微量法

GOY-01S6355

商品介紹

測定意義

ICDHcEC 1.1.1.42)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時還原NADP+生成NADPHICDHc是細胞質中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會發生顯著變化。

測定原理:

利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應,在340 nm下測定NADPH濃度的增加。

所需的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153443.png

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;

2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。

AR,99.0%β-萘酚 ARNrf2 peptide  核因子2相關因子2抗原

己二酸 超純級,≥99.5% (HPLC)β-萘酚 分析標準品, ≥99.5%(GC)NRF-1(nuclear respiratory factor-1)  核呼吸因子-1抗原

 ACS, ≥99.0%β-萘酚 熒光指示劑, ≥99.0% (GCNSE (neuron specific enolase)  神經元特異性烯化抗原

AR,99.5% (劇品) Standard for GC,≥99.8% (GC)NTCP(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide)  鈉離子/牛磺膽酸共轉運蛋白抗原

光譜級,≥99.5%(GC)鄰苯二 AR,98%Obestatin/Ghrelin/GHRP  肥胖抑制素抗原

 色譜級,≥99.8%(GC)3-二乙基 99%OCLN(Occluding)  咬合蛋白抗原

乙酸酐 AR,98.5%(易制品)N,N-二甲基正辛 95%Oct-4(Octamer-4)  胚胎干關鍵蛋白抗原

冰乙酸 AR,99.5%癸 98%ODC(Ornithine decarboxylase)  脫羧抗原

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)微量法多效唑 分析標準品,>99%(HPLC)大象雌激素(E)免疫試劑盒三焦抗體GFP  綠色熒光蛋白抗體

多效唑標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:植物ELISA試劑盒2,3-雙加氧抗體GFP  綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)

多效唑標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:植物蔗糖合成(SPS)免疫試劑盒白介素19抗體GFOD2  葡萄糖果糖還原2抗體

二戊樂靈 分析標準品,99%植物玉米素核苷(ZR)免疫試劑盒抑制素A/Inhibin α抗體GFI1B  獨立生長因子1B抗體

二戊樂靈標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:酮植物乙(IAA)免疫試劑盒胰島素因增強結合蛋白1/2抗體GFAP delta  膠質纖維性蛋白GFAPδ抗體

二戊樂靈標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮植物K1(VK1)免疫試劑盒化白介素-1受體相關激1抗體GFAP  膠質纖維性蛋白抗體

猛殺威 分析標準品,98.5%植物E(VE)免疫試劑盒化白介素-1受體相關激1抗體GERP/TRIM8/RNF27  環指蛋白27抗體

咪鮮 分析標準品,95.5%植物3(VD3)免疫試劑盒化白介素-1受體相關激1抗體Gephyrin  橋尾蛋白抗體

咪鮮標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:植物2(VD2)免疫試劑盒干擾素調節因子3Gentamicin(3G7)  素單克隆抗體

咪鮮標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:植物(VD)免疫試劑盒化干擾素調節因子3Gentamicin  素抗體

嘧霉 分析標準品,98.5%植物C(VC)免疫試劑盒干擾素調節因子7抗體Geminin  DNA復制抑制因子抗體

甜菜寧 分析標準品,99%植物B6(VB6)免疫試劑盒化干擾素調節因子7抗體Gelsolin  凝溶膠蛋白抗體

戊菌隆 分析標準品,99.5%植物B12(VB12)免疫試劑盒化胰島素受體底物-1抗體GDPD5  甘油二酯結構域5抗體

嘧肟草 分析標準品,98%植物A(VA)免疫試劑盒化胰島素受體底物-1抗體GDPD3  甘油二酯結構域3抗體

菊酯標準溶液 100μg/ml,u=4%,體:正己烷植物茄呢2,葉綠體(SPS2/SPPS)免疫試劑盒化胰島素受體底物-1抗體GDPD2/GDE3  促進成骨分化因子抗體

測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。


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