細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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產品名稱 | |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X96498 |
商品屬性：
名稱 P19 (P-19) (小鼠畸胎瘤細胞) 別稱P-19 種屬小鼠 年齡（性別）雄性 組織來源胚胎；畸胎癌 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述P19細胞是從C3H/He小鼠中誘導的畸胎癌中建立的；P19細胞在含有0.1mMβ-巰基乙醇的培養基中克隆的效率高。細胞具有多能性：在500nMA酸誘導下，細胞可以分化成神經樣和神經膠質樣細胞；在0.5%-1.0%二甲亞砜(DMSO)存在下，細胞分化形成心臟和骨骼肌樣基質，但不形成神經樣或神經膠質樣細胞。在DMSO和A酸同時存在時，細胞的分化與只有A酸一樣。 生物安全等級1 生長培養基MEMα＋7.5% CS＋2.5% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~48-72小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
甲型流感 H7N7 (equine/Kentucky/1a/1975) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽
甲型流感 H7N2 (ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽
甲型流感 H7N1 (turkey/Italy/4602/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長O
P19 (P-19) (小鼠畸胎瘤細胞)100 mg MEQ，（6-甲氧-N-乙基） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.78-50 ng/mL 人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒
2 ug pGL3- enhancer pGL3- enhancer 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/ml 人組織蛋白C（CTS-C）ELISA試劑盒
500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.5 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.5 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ubiquitin-associated protein 2
尿素 20支 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Growth/differentiation factor 2
2 ug pBAD18 pBAD18 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Multidrug resistance-associated protein 6
100g 聚乙烯吡咯烷酮 K360 Polyvinylpyrrolidone(PVP K360) 室溫保存 0.312-20 ng/mL 人鈣調素(RC)ELISA試劑盒
1.5mL DNA尿素-PAGE上樣液 DNA Urea-PAGE Loading Buffer -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Kallikrein-6
25uL Cy5-dCTP溶液 (10 mM) Cy5-dCTP Solution -20℃保存
10mL 氨芐溶液,50mg/mL Ampicillin Solution -20℃保存 312-20000 pg/mL ELISA Kit for Human Pikachurin
2 ug pLVX-mCherry-N1 pLVX-mCherry-N1 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Protransforming growth factor alpha
七葉苷培養基 Esculin Medium 10 15.6-1000 pg/mL 人輔Q結合蛋白COQ10同系物B(CQ10B)ELISA試劑盒
